Cinq réglages de base des microscopes pour la recherche en TPA

La procréation médicalement assistée (PMA) fait référence aux procédures et traitements utilisés pour lutter contre l'infertilité. Olympus propose différents types de microscopes pour un large éventail d'applications de recherche dans le domaine de la procréation médicalement assistée, notamment :

• Stéréomicroscopes pour l'observation du nettoyage des ovocytes, de la congélation des ovocytes et de la décongélation des embryons
• Microscopes droits pour l'observation des spermatozoïdes
• Microscopes inversés pour le flux de travail liés à l'injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI), à l’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes morphologiquement sélectionnés (IMSI) et à l'observation des fuseaux

Un réglage approprié de votre microscope pour ces tâches peut améliorer la qualité des images observées. Pour faciliter votre travail, la présente note d'application vous explique cinq réglages de base des microscopes afin d'optimiser vos observations quotidiennes et votre flux de travail. Notez que les procédures mentionnées ci-dessous se concentrent sur les microscopes inversés et les stéréomicroscopes Olympus couramment utilisés.
 

1. Réglage de l'axe optique

Pour régler l'axe optique sur un microscope inversé IX73 ou IX83, procédez comme suit :

1. Déplacez le levier du diaphragme à iris d'ouverture sur le condenseur vers la position la plus à gauche pour ouvrir le diaphragme.
2. Déplacez le levier du diaphragme à iris de champ sur le montant d'éclairage vers la position la plus à gauche pour ouvrir le diaphragme.
3. Mettez au point sur l'échantillon à l'aide d'un objectif 10X.
4. Déplacez légèrement le levier du diaphragme à iris de champ vers la droite pour réduire le diaphragme à iris de champ afin que son image soit dans le champ de vision. (La figure 2a montre la vue à travers l'oculaire.)
5. Tournez la poignée du condenseur qui se déplace vers le haut et vers le bas pour effectuer la mise au point sur l'image du diaphragme à iris de champ.
   Assurez-vous de voir le polygone clairement (figure 2b).
6. Insérez les deux tournevis hexagonaux attachés dans les trous des vis de réglage. Tournez la vis de centrage du condenseur pour le déplacer au centre du champ de vision (figure 2c).
7. Ouvrez le levier du diaphragme à iris de champ jusqu'à ce que l'image se trouve tout juste hors du champ de vision.

À l’aide du système CM20, nous avons testé la possibilité d'observer en trois dimensions le processus de différenciation et de développement d'organoïdes hépatiques cultivés dans du Matrigel.^*1

Figure 1 : Microscope IX73 avec condenseur manuel IX2-MLWCD

2. Réglage de la distance interpupillaire

Le réglage de la distance interpupillaire modifie la largeur entre les oculaires en fonction de la largeur des yeux de l'observateur, pour une observation plus claire. Le réglage correct de la distance interpupillaire permet de voir une image claire à travers les oculaires. Si vous regardez dans les oculaires et voyez deux images, c’est que la distance interpupillaire doit être ajustée.

Pour régler la distance interpupillaire sur un microscope inversé IX73 ou IX83 ou un stéréomicroscope SZX10 ou SZX16, procédez comme suit :

1. Regardez dans l'oculaire à la bonne position du point oculaire (figure 3) tout en concentrant votre regard sur l'échantillon. Pour observer confortablement, vos yeux doivent être à une certaine distance de l'oculaire. Si vous portez des lunettes, assurez-vous qu'elles touchent le verre des oculaires. Si vous observez à l'œil nu, appuyez vos yeux contre les œilletons en caoutchouc fixés aux oculaires.

   
   Figure 3

2. Élargissez ou réduisez horizontalement la distance entre les oculaires gauche et droit de manière à ce que les champs de vision gauche et droit apparaissent comme une seule image centrée. Rapprochez vos yeux de l'oculaire tout en regardant cette image unique. Répétez ce réglage pour que l'œil droit, l'œil gauche et les deux yeux aient le même champ de vision.

   
   Figure 4

3. Réglage dioptrique

Le réglage dioptrique corrige la différence entre les champs de vision gauche et droit et réduit au minimum le changement de mise au point dû au changement d'objectif. Étant donné que la dioptrie varie d’une personne à l’autre, le réglage dioptrique doit être effectué pour chaque utilisateur.

Pour régler la dioptrie sur un microscope inversé IX73 ou IX83, procédez comme suit :

1. Des deux côtés, réglez l'échelle sur la bague de réglage de la dioptrie sur la position « 0 ».

   
   Figure 5

2. Insérez un objectif à faible grossissement (par exemple, 10X) dans le trajet optique. Regardez dans l'oculaire droit avec votre œil droit et effectuez la mise au point sur l'échantillon à l'aide de la poignée de déplacement grossier.
3. Insérez à nouveau un objectif à faible grossissement (par exemple, 10X) dans le trajet optique. Tout en regardant l'échantillon avec l'œil droit, faites pivoter uniquement la bague de réglage de la dioptrie sur le côté droit (côté tube d'observation : partie dentelée de la figure 6a) pour effectuer la mise au point sur l'échantillon.

   
   Figure 6

4. Regardez dans l'oculaire gauche avec l'œil gauche et faites uniquement pivoter la bague de réglage de la dioptrie (figure 6b) sur le côté gauche (côté oculaire) pour effectuer la mise au point sur l'échantillon.

4. Réglage de la bague de correction sur un objectif

En raison de l'influence du fond du récipient d'échantillon, une aberration sphérique (erreur optique dans laquelle la lumière ne s'est pas concentrée en un point unique de l'axe optique) peut se produire dans l'image observée. Cela peut rendre l'image floue. Le rôle de la bague de correction d’un objectif consiste à réduire cette aberration.

Figure 7

Les objectifs Olympus sont optiquement conçus pour une épaisseur de récipient de 1,5 mm, qui est l'épaisseur standard d'une lamelle. Cela signifie que lorsque la bague de correction de l'objectif est réglée sur une position de 1,5, l'épaisseur totale du fond de la plaque thermique et du récipient doit être de 1,5 mm. Cette épaisseur totale vous permet de tirer le meilleur parti de votre objectif.

Pour répondre à ces exigences d'épaisseur spécifiques, choisissez soigneusement une plaque thermique qui fonctionne avec le récipient de votre échantillon. Pour une boîte de Pétri en plastique d'une épaisseur de 1 mm, choisissez une plaque thermique d'une épaisseur de 0,5 mm. Pour une boîte de Pétri à fond en verre d'une épaisseur de 0,17 mm, choisissez une plaque chauffante d'une épaisseur de 1,3 mm.

Vous pouvez également régler la bague de correction de l'objectif en fonction de l'épaisseur combinée de la plaque thermique et du récipient (en cas d'utilisation du microscope inversé IX73). Deux exemples :

Exemple 1 : Lorsque la plaque thermique a une épaisseur de 0,5 mm et que la boîte de Pétri en verre a une épaisseur de 0,17 mm, ajoutez les épaisseurs (0,5 + 0,17 mm = 0,67 mm) et réglez la bague de correction à la position de 0,67 mm (figure 8).

Figure 8

Exemple 2 : Lorsque la plaque thermique a une épaisseur de 0,5 mm et que la boîte de Pétri en plastique a une épaisseur de 1 mm, ajoutez les épaisseurs (0,5 + 1 mm = 1,5 mm) et réglez la bague de correction à la position de 1,5 mm (figure 9).

Figure 9

5. Réglage de la parfocalité du zoom

Le réglage de la parfocalité du zoom évite les problèmes de mise au point lors du passage d'un grossissement faible à un grossissement élevé. Si ce réglage est effectué correctement, il n'est pas nécessaire d'ajuster la mise au point chaque fois que vous changez le grossissement pendant des tâches comme le nettoyage des ovocytes. Cela peut améliorer l'efficacité du travail.

Pour régler la mise au point du zoom sur un stéréomicroscope SZX10 ou SZX16, procédez comme suit :

1. Réglez la poignée du zoom sur le côté du grossissement minimum et effectuez la mise au point à l'aide de la poignée de déplacement grossier.
2. Déplacez progressivement la poignée du zoom vers le côté du grossissement élevé et effectuez la mise au point avec la poignée de réglage fin, puis augmentez-la jusqu'au grossissement maximum et effectuez la mise au point.
3. Replacez la poignée du zoom sur le côté à faible grossissement. Si la vue n'est pas au point, faites pivoter la bague de réglage dioptrique des oculaires gauche et droit pour effectuer la mise au point.
4. À nouveau, réglez la poignée du zoom sur le côté du grossissement maximal et vérifiez que la vue est bien au point. Si elle n'est pas au point, répétez les étapes 2 et 3. Le réglage de la mise au point du zoom est terminé lorsque les grossissements minimum et maximum sont mis au point.
5. Réglez la largeur de l'œil de manière à ce que les deux yeux voient un seul champ de vision.

   
   Figure 10