En este seminario web, Stefan, Lauren y Chunsong explicarán cómo crear imágenes de superresolución de forma sencilla. La superresolución de Olympus emplea el sistema confocal de disco giratorio IXplore SpinSR para combinar velocidad, sensibilidad y resolución para ofrecer un procesamiento de imágenes de superresolución compatible con las células vivas. Explicarán los pasos necesarios para crear imágenes de superresolución, incluyendo las reasignaciones ópticas, análisis Fourier y deconvolución 3D.
Preguntas más frecuentesPreguntas frecuentes del seminario web | Procesamiento de imágenes de superresolución para células vivas¿Cuáles son las ventajas del sistema IXplore SpinSR comparado con los microscopios de iluminación estructurada basados en campo amplio?La velocidad es una de las principales ventajas de trabajar con el microscopio IXplore SpinSR. En microscopios basados en campo amplio, la retícula tiene que rotar varias veces y el tiempo de exposición de la cámara limita la velocidad en las diversas exposiciones. En el sistema IXplore SpinSR, la óptica basada en un disco giratorio elimina la necesidad de usar una retícula de iluminación estructurada para que pueda recopilar imágenes de forma más rápida con menos fotogramas. Otra de las ventajas es que el microscopio IXplore SpinSR tiene una capacidad de profundidad superior, de modo que puede usar una muestra gruesa y obtener una imagen mejorada gracias a sus capacidades confocales. La deconvolución en 3D es necesaria para conseguir una resolución de 120 nm?La óptica dedicada del hardware y el algoritmo de superresolución de Olympus (OSR) son los componentes clave del sistema que pueden alcanzar una resolución de 120 nm. Sin embargo, la deconvolución mejorará todavía más el contraste y la calidad de imagen. ¿Qué software utiliza el microscopio Olympus IXplore SpinSR?El sistema funciona con el software Olympus cellSens, que se utiliza ampliamente para los microscopios Olympus y puede reconocer al instante el hardware correcto. Además, la interfaz de usuario es intuitiva y fácil de usar. ¿Qué tipo de sistemas de detección están disponibles con el microscopio Olympus Ixplore SpinR y cuál es la velocidad de fotograma?En el procesamiento de imágenes, cuanto más pequeño sea el píxel mejor será la resolución. Con píxeles inferiores, tendrá que contar con una sensibilidad superior y deberá tener cuidado con el ruido, por lo que la opción más recomendada sería una cámara CMOS científica con refrigeración Peltier. Utilizamos una cámara científica 2k × 2k con una eficiencia cuántica superior al 80%. No obstante, la principal limitación es la muestra. Si tiene una muestra más clara, el tiempo de exposición de la cámara decide la velocidad de fotogramas y no tendrá que adquirir varias imágenes para construir una imagen de superresolución. Entonces, si para cada exposición obtenemos una imagen con superresolución, podemos alcanzar hasta 100 fotogramas por segundo. Además, el sistema le ofrece la opción de tener dos cámaras y podrá visualizar dos colores simultáneamente. Sin embargo, el sistema también incorpora un filtro de emisión rápida integrada que le permite realizar un procesamiento de imágenes rápido, multicolor y secuencial dependiendo del número de láseres y filtros de emisión. ¿Qué tipos de láseres incorpora el sistema IXplore SpinSR?Proporcionamos todos los láseres comunes que tienen los microscopios confocales convencionales. Tenemos láseres de estado sólido que son muy robustos y estables y duran más tiempo que los láseres de gas convencionales, con 405, 488, 560 y 640 de serie. ¿Se puede usar el sistema Olympus IXplore SpinSR para cribado de alto contenido?Sí, absolutamente. Olympus ofrece el software de cribado de alto contenido avanzado scanR. Incorpora muchas funciones únicas como el último módulo de IA con autoaprendizaje (deep learning). Cuenta con una interfaz interactiva muy potente, puede realizar barridos a varios niveles y es extremadamente versátil. Específicamente para el cribado de alto contenido, ofrece niveles excepcionales de velocidad y precisión gracias a la función de adquisición paralela integrada en el software scanR. Se pueden realizar experimentos de estimulación fotográfica en el sistema IXplore SpinSR en combinación con el procesamiento de imágenes confocales?Sí. Además, el controlador en tiempo real del sistema puede controlar el hardware más antiguo a través del TLL, que es mucho más preciso para los experimentos con dependencia temporal. ¿Sus lentes de objetivos tienen collares de corrección para aberraciones esféricas? ¿Son fáciles de ajustar?Ofrecemos objetivos dedicados a la aplicación de la línea A con collares de corrección y un objetivo de inmersión de silicona que tiene una larga distancia de trabajo. Tiene un collar de corrección y el aceite de silicona se adapta mejor al índice de refracción de la muestra, para poder visualizar a mayor profundidad con menos aberraciones. También contamos con objetivos especiales de alta apertura numérica, lentes de plano acromático que tienen una A.N. de 1,5 y que incorporan un collar de corrección para poder ajustar distintas temperaturas. Por lo tanto, teóricamente podríamos alcanzar las 200 micronas si estamos usando un objetivo de inmersión de silicona 30x. |
