Étude de la réponse des mitochondries à des médicaments à l’intérieur de sphéroïdes tumoraux

Il est possible de visualiser l’effet d’un agent de découplage sur les mitochondries à l’intérieur de sphéroïdes. 
Cette approche constitue une méthode prometteuse pour l’évaluation de la toxicité des agents thérapeutiques sur les mitochondries.

Objectifs

Les mitochondries sont des organites essentiels qui fournissent aux cellules l’énergie dont elles ont besoin. La toxicité pour la fonction mitochondriale est un facteur important qui doit être testé pour tout nouvel agent thérapeutique. Au cours de cette étude, nous avons étudié la réponse des mitochondries à des médicaments dans des cultures cellulaires 3D

Préparation des échantillons

Du milieu de culture a été ensemencé par une suspension de cellules HT-29 dans une microplaque de 96 puits à fond en U. Les cellules ont ensuite été incubées pendant 96 heures en vue de préparer les cultures cellulaires 3D. Les sphéroïdes ont été incubés en présence de MitoTracker® Red CMXRos (un fluorophore qui marque les mitochondries en fonction de leur potentiel de membrane) et de FCCP (un agent de découplage, 0 - 300 µM) pendant 45 minutes, puis fixés au formol à 4 %. Les noyaux des cellules ont ensuite été marqués avec du DAPI.

Conclusion
Acquisition et analyse des images

Des images confocales en fluorescence des sphéroïdes susmentionnés ont été acquises. La luminosité moyenne du noyau et des mitochondries dans une cellule a été estimée par superposition des images prises tous les 5 μm à l’aide de la méthode de projection d’intensité moyenne. Aucun effet du FCCP sur la luminosité moyenne des noyaux n’a été observé (figure 1 [a]), tandis que celle des mitochondries d’une cellule décroît à mesure que la concentration en FCCP augmente (figures 1 [b] et 2).

MitoTracker est une marque déposée de Molecular Probes, Inc.
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