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Notas de aplicação

A resposta da mitocôndria em esferoides tumorais a medicamentos


É possível visualizar o efeito de um agente de desacoplamento nas mitocôndrias em esferoides.
Este é um método promissor para testar a toxicidade nas mitocôndrias.

Objetivos

As mitocôndrias são organelas indispensáveis que fornecem energia celular. A toxicidade na função mitocondrial é um fator importante a ser testado para novos compostos. Neste estudo, foi investigada a resposta das mitocôndrias em culturas de células 3D a medicamentos.

Objectives

Preparação de amostras

Foi semeada uma suspensão de células HT-29 em uma placa de 96 poços de fundo em U e incubada por 96 horas para preparar culturas de células 3D. Os esferoides foram incubados com MitoTracker® Red CMXRos (um corante de coloração mitocondrial dependente do potencial da membrana) e FCCP (agente de desacoplamento, 0–300 μM) por 45 minutos, seguido de fixação em formalina a 4% e coloração nuclear com DAPI.

Conclusão
Aquisição e análise das imagens

Foram obtidas imagens fluorescentes confocais dos esferoides mencionados acima. A luminosidade média dos núcleos e mitocôndrias em uma célula foi estimada pela sobreposição de imagens obtidas a cada 5 μM usando o método de projeção de intensidade média. Não foi observado qualquer efeito do FCCP nos núcleos (Figura 1 (a)), enquanto a luminosidade média das mitocôndrias em uma célula diminuiu com o aumento na concentração de FCCP (Figuras 1 (b) e 2).

Conclusion

MitoTracker é uma marca registrada da Molecular Probes, Inc.
Olympus é uma marca registrada e NoviSight e Insightful Analysis, Intelligent Answers são marcas da Olympus Corporation.

Produtos usados nesta aplicação

Software de análise celular 3D

NoviSight

  • Reconhecimento de imagem 3D de toda a estrutura até o subcelular
  • Análise estatística
  • Variedade de ensaios padrão

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