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应用资料

肿瘤肿瘤微球肿瘤微球中线粒体对药物的反应


解偶联剂对微球内线粒体的作用可以实现可视化。
这是测试线粒体毒性一种很有前景的方法。

目的

线粒体是在提供细胞能量方面必不可少的细胞器。线粒体功能毒性是测试新化合物的重要因素。本研究考察了3D细胞培养物内线粒体对药物的反应。

目的

样品的制备

HT-29细胞悬液种入U型底96孔板上,孵育96小时制备3D细胞培养物。使用MitoTracker®Red CMXRos(一种膜电位依赖性线粒体染色染料)和FCCP(解偶联剂,0-300μM)孵育微球45分钟,然后固定在4%福尔马林中并使用DAPI进行核染色。

结论
图像的采集和分析

获得上述微球的共聚焦荧光图像。通过使用平均荧光强度投影法叠加每5μM采集的图像,即可估算细胞中细胞核和线粒体的平均发光度。没有观察到FCCP对细胞核的影响(图1(a)),而细胞中线粒体的平均发光度随FCCP浓度的增加而降低(图1(b)和2)。

Figure1:(a)细胞核发光度的FCCP浓度依赖性变化 (b)细胞线粒体发光度的FCCP浓度依赖性变化  图2:(a)没有FCCP情况下的微球图像 (b)存在300μMFCCP情况下的微球图像

MitoTracker为Molecular Probes,Inc.的注册商标。
Olympus为注册商标,NoviSight和Insightful Analysis、Intelligent Answers均为Olympus Corporation的商标。

Products used for this application

3D细胞分析软件

NoviSight

  • 从完整结构到亚细胞级别的3D图像识别
  • 统计分析
  • 多种默认检测方法

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