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Note d’application

Évaluation de l’efficacité de médicaments : la réponse des sphéroïdes à un médicament


Lorsqu’elle est associée à l’utilisation du système d’analyse cellulaire, l’observation au microscope confocal permet d’évaluer l’efficacité d’un médicament sur des sphéroïdes marqués avec un fluorophore adapté.

Objectifs

Jusqu’à présent, la plupart des analyses d’efficacité des médicaments anticancéreux reposaient sur l’utilisation de cellules immobilisées cultivées en monocouches bidimensionnelles. Ces monocouches 2D ne sont cependant pas capables de refléter fidèlement la complexité de l’environnement natif tridimensionnel des cellules cancéreuses. D’où l’intérêt qui s’est porté sur l’utilisation de cultures cellulaires 3D telles que les sphéroïdes comme modèles potentiellement capables d’améliorer la justesse physiologique des études sur les cellules. Au cours de cette étude, l’efficacité de l’activité de la staurosporine (STS) sur des sphéroïdes a été évaluée par observation au microscope confocal et utilisation du système d’analyse d’imagerie cellulaire.

Objectives

Préparation des échantillons

Du milieu de culture a été ensemencé par une suspension de cellules HeLa dans une microplaque de 96 puits PrimeSurface® (SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) à raison d’une densité d’ensemencement de 500 cellules/puits. 48 heures après le début de la culture cellulaire, de la STS diluée en série a été ajoutée dans chaque puits. 24 heures après l’ajout de la STS, du Hoechst 33342 (fluorophore marquant spécifiquement les noyaux) et de l’iodure de propidium (IP : fluorophore marquant spécifiquement les cellules mortes) ont été ajoutés dans chaque puits.

Conclusion
Acquisition et analyse des images en fluorescence

Des images en fluorescence des sphéroïdes préparés comme ci-dessus et marqués au Hoechst 33342 et à l’IP ont été acquises à l’aide du système. Comme illustré dans la figure 1, le rapport entre le nombre de cellules mortes (en rouge) et le nombre total de cellules (en bleu) dans chaque puits augmente avec l’accroissement de la concentration en STS. Il est possible de générer une représentation graphique des rapports en fonction de la concentration en STS (figure 2, barres : écart-type, n=8) à partir des résultats d’identification des noyaux et de leur numération générés par le logiciel d’analyse. Ces résultats indiquent que le système permet d’évaluer facilement l’efficacité d’un médicament à partir d’une microplaque.

Figure 1: images de sphéroïdes illustrant l'évolution du rapport nomble de cellules mortes/nomble total de cellules en fonction de la concentration en STS

Figure 1: images de sphéroïdes illustrant l’évolution du rapport nomble de cellules mortes/nomble total de cellules en fonction de la concentration en STS

Figure 2: rapport nomble de cellules mortes/nomble total de cellules des sphéroïdes en fonction de la concentration en STS

Figure 2: rapport nomble de cellules mortes/nomble total de cellules des sphéroïdes en fonction de la concentration en STS

PrimeSurface est une marque déposée de Sumitomo Bakelite Co., Ltd.
Olympus est une marque déposée, et NoviSight, Insightful Analysis et Intelligent Answers sont des marques de commerce d’Olympus Corporation.

Appareil requis pour cette application

Logiciel d’analyse cellulaire 3D

NoviSight

  • Identification de la structure d’ensemble jusqu’à la structure infracellulaire via l’image 3D
  • Analyse statistique
  • Grande variété d’analyses par défaut

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