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体视显微镜入门介绍:透射光观察方法

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体视显微镜观察方法

体视显微镜是一种用于对标本进行宏观和立体观测的实用工具。这类显微镜为每只眼睛提供了单独的观察光路,从而让标本具备一定的深度,看起来就像您用眼睛直接对其进行观察一样立体。

体视显微镜主要有两种照明方式:反射光照明和透射光照明。

  • 反射光照明让光线向下照射到标本上,让您通过反射光进行观察。这种照明方式最适合不透明的标本的观测,比如岩石、矿物、植物、昆虫和陶瓷。

  • 透射光照明光线向上照射并穿透标本。这种照明方式最适合半透明标本,比如细胞、组织、胚胎、斑马鱼或其他小型水生生物样品的观测。

体视显微镜

标本的类型决定了哪种照明方式的观测效果最佳。在很多情况下,您可能需要使用多种方法。每种照明方式还包含以下几种观察方法,如表1所示。

表1 –体视显微镜的常用观察方法

观察方法
反射光照明 倾斜
同轴
偏光
荧光
透射光照明 明场
暗场
斜照明
偏光

今天,我将介绍一下透射光照明,以便让您进一步了解其观察方法。

4种透射光照明的常用观察方法

我们已经介绍了透射光照明最常用的观察方法,下面让我们进一步探索其特点和常见应用。

  • 明场:明场透射照明是目前使用最广泛的观察方法。透射光直接照射在标本下方。当光线透过标本时,透射光通过标本密度较大区域会导致强度的衰减,从而形成成像对比度。如果标本未染色且本身没有颜色,这种观测方法只能获得少量信息。在这种情况下,使用其他观察方法可能会是更好的选择。

  • 暗场:暗场透射照明特别适合未染色和透明的标本。该条件下穿过标本中心的光线会被遮挡,只有来自各方位角的倾斜光线会照射到标本上。这些倾斜光线由于光学不连续性而发生衍射、反射和/或折射。最终效果就是在黑色背景上呈现出明亮的标本图像。

  • 斜照明:倾斜透射照明也适用于未染色和透明的标本。此方法让您可以通过调整光线的角度获得一定的对比度。其对比度高于明场成像,但低于暗场成像。使用斜照明的方法,您可以轻松通过图像中标本外观的变化找到适当的照明角度。

  • 偏光照明:偏振光透射照明适用于具有多种折射率的各向异性标本(双折射标本)。由于双折射标本必须放置在起偏器和检偏器之间,因此偏光照明需要额外的部件。平面偏振光与双折射标本的相互作用,这种相互作用将产生两个在相互垂平面上偏振的独立波分量,并产生对比度。

斑马鱼的明场观察图像

使用明场观察方法得到的斑马鱼图像

青鳉的斜照明图像(左)。青鳉的暗场观察图像(右)。

使用斜照明(左)和暗场(右)观察方法得到的青鳉图像

扩大观察范围

快速、轻松地在观察方法之间进行切换的能力可以帮助您有效获取样品的相关信息。我们的LED透射光体视显微镜座可以帮助您快速、轻松地在明场、倾斜、暗场和偏光照明之间以及不同对比度方法之间进行切换。若要了解其操作方法,欢迎阅读我们的下一篇博客文章!

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产品经理

Janeen Manning是奥林巴斯美洲公司科学解决方案部门临床和教育显微镜的产品经理。她拥有缅因州大学生物化学、微生物学和分子生物学的理学学士学位,以及哈佛大学生物技术的文科硕士学位。自2017年以来,她一直在奥林巴斯工作;加入奥林巴斯之前,她曾在一家传染病相关医疗器械公司工作。

2020年3月9日
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