Sur un microscope, il n’est pas toujours suffisant d’allumer la source de lumière pour obtenir un éclairage lumineux et uniforme. Les microscopes étant des systèmes optiques sophistiqués, leur entretien et leur réglage sont essentiels pour s’assurer qu’ils produisent des images de qualité optimale. L’un des réglages optiques les plus faciles à effectuer est le réglage de l’éclairage de Köhler pour les images en fond clair en lumière transmise.
La procédure de réglage pour l’éclairage de Köhler est la même pour les microscopes droits et inversés, mais l’emplacement du condenseur et des diaphragmes de champ et d’ouverture varient d’un microscope à l’autre. Assurez-vous de consulter le manuel de votre microscope si vous avez de la difficulté à localiser ces composants.
Conseil de pro : Assurez-vous que vos composants optiques sont propres avant de commencer cette procédure ; un objectif sale peut rendre le réglage de l’éclairage de Köhler plus difficile qu’il ne devrait l’être.
1. Utilisez un objectif de faible grossissement
L’utilisation d’un objectif de faible grossissement sur votre microscope, comme un grossissement de 10X, vous permet d’obtenir un champ de vision large et une grande profondeur de champ.
2. Effectuez la mise au point sur votre échantillon
Pour assurer la bonne position des ouvertures dans le trajet optique, effectuez la mise au point sur l’échantillon comme point de départ pour le reste des réglages optiques.
3. Fermez le diaphragme de champ
Une fois la mise au point réalisée sur l’échantillon, fermez complètement le diaphragme de champ. Si le contour du diaphragme n’est pas net, ajustez la hauteur du condenseur jusqu’à ce que les lames du diaphragme de champ et l’échantillon soient aussi nets que possible.
4. Centrez le diaphragme de champ
Ensuite, ajustez la position du diaphragme de champ afin que celui-ci soit au centre de l’image du microscope. Utilisez les deux boutons à l’avant du condenseur pour régler la position XY du diaphragme de champ.
Pour vérifier que le diaphragme de champ est bien centré, ouvrez-le jusqu’à ce que vous voyiez les bords de l’octogone atteindre le bord du champ de vision. Faites les ajustements nécessaires.
5. Réglez le diaphragme d’ouverture
Une fois que vous avez votre image, réglez le diaphragme d’ouverture pour contrôler le contraste et la résolution. Vous pouvez utiliser une lentille de Bertrand ou un composant optique similaire pour visualiser le plan focal arrière. Vous devez remplir le champ de vision à environ 75 %, de sorte que 25 % du champ soient obscurs et 75 % éclairés.
Comparaison de la qualité d’image lorsque le diaphragme est trop grand (à gauche), réglé de manière optimale (au centre) et trop petit (à droite)
6. Faites sortir le diaphragme de champ du champ de vision
Enfin, ouvrez le diaphragme de champ afin qu’il soit tout juste en dehors du champ de vision. Évitez de l’ouvrir complètement, car cela dégradera votre image.
C’est tout ! Vous disposerez alors d’un champ d’éclairage uniforme et lumineux et profiterez donc d’images de microscopie de haute qualité.
Si vous souhaitez approfondir vos connaissances sur l’éclairage de Köhler, consultez notre guide à ce sujet dans le Centre de ressources de microscopie. Vous y verrez une description détaillée de la technique.
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