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Como alinhar a iluminação Köhler em 6 etapas simples

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Comparação da qualidade da imagem quando o diafragma de abertura é muito amplo, definido idealmente e muito pequeno durante o alinhamento de iluminação Köhler

Para ter uma iluminação clara e uniforme em um microscópio nem sempre basta ligar a fonte de luz. Os microscópios são sistemas ópticos sofisticados que precisam de cuidado e ajuste para produzirem imagens de qualidade ideal. Um dos alinhamentos ópticos mais fáceis é a iluminação Köhler para imagens de campo claro de luz transmitida.

O processo de alinhamento da iluminação Köhler é o mesmo em microscópios verticais e invertidos, mas a posição do condensador, do limitador de campo visual e do diafragma de abertura pode ser diferente. Consulte o manual do seu microscópio se tiver problema para localizar esses componentes.

Dica profissional: verifique se os componentes ópticos estão limpos antes de iniciar o processo. Uma objetiva suja pode dificultar desnecessariamente o alinhamento Köhler.

1. Mude para uma objetiva de baixa ampliação

Mudar para uma objetiva de baixa ampliação no microscópio, como 10X, oferece um amplo campo de visão e grande profundidade de foco.

Imagem borrada quando a objetiva de ampliação menor está configurada no processo de iluminação Köhler

2. Focalize a amostra

Para garantir a posição correta das aberturas na trajetória ótica, focalize a amostra como o ponto de partida para o restante dos ajustes ópticos.

Imagem focalizada da amostra no processo de iluminação Köhler

3. Feche o diafragma de campo

Assim que a amostra estiver focalizada, feche totalmente o diafragma de campo. Se estiver desfocado, ajuste a altura do condensador até que as lâminas no diafragma de campo estejam as mais nítidas possível, correspondendo ao foco da amostra.

Ilustração mostrando como fechar o diafragma de campo da iluminação Köhler

4. Centralize o diafragma de campo

Em seguida, ajuste a posição do diafragma de campo para que fique no centro da imagem do microscópio. Use os dois botões giratórios na parte da frente do condensador para ajustar a posição XY do diafragma de campo.

Para confirmar a posição central, abra o diafragma de campo até ver as bordas do octágono chegarem à borda do diafragma de campo. Ajuste conforme o necessário.

Ilustração que mostra como centralizar o diafragma de campo da iluminação Köhler

5. Ajuste o diafragma de abertura

Depois de ter uma imagem, ajuste o diafragma de abertura para controlar o contraste e a resolução. Você pode usar lentes Bertrand ou elemento óptico similar para ver o plano focal traseiro. Você deve ajustar para cerca de 75% do campo de visão.

Qualidade da imagem quando o diafragma de abertura é pequeno demais para a iluminação Köhler

Comparação da qualidade da imagem quando o ajuste do diafragma de abertura é muito amplo (esquerda), ideal (centro) e muito pequeno (direita).

6. Elimine o diafragma de campo do campo de visão

Por fim, abra o diafragma de campo para que fique fora do campo de visão. Evite abrir completamente porque isso causará a degradação da imagem.

Pronto! Agora você tem um campo claro e uniforme de iluminação para imagens de microscopia de alta qualidade.

Se tiver interesse em saber mais sobre a iluminação Köhler, confira o Centro de recursos de microscópios que analisa a técnica em detalhes.

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Gerente de Produto Sênior, Microscopia de Ciências da Vida

Lauren Alvarenga é gerente de produto sênior para microscopia clínica na Evident. É especializada em lentes objetivas e software de formação de imagem. Tem um Bacharelado de Ciências em Comunicações Biomédicas Fotográficas pelo Rochester Institute of Technology.

Fev 03 2022
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