明亮、均匀的显微镜照明并不总是像打开光源那么简单。 由于显微镜是精密的光学系统,它们需要保养和调整,以确保产生最佳质量的图像。 最简易的光学调校之一是用于透射光明场图像的柯勒照明。
对于正置和倒置显微镜,柯勒照明的调校过程是相同的,但不同显微镜的聚光镜、视场光阑和孔径光阑的位置存在差异。 如果您在查找这些组件时遇到困难,请务必查阅显微镜手册。
专业提示:在开始这个过程之前,确保您的光学元件洁净;脏污的物镜可能会让柯勒照明的调校难度增加。
1. 切换到低倍物镜
改用低倍物镜(如10倍物镜)可以获得宽广视野和长焦深。
![柯勒照明调校过程中物镜设置为最低倍率时的模糊图像](https://static4.olympus-lifescience.com/data/Image/blog-images/Koehler-blog-fig-1.jpg?rev=D1E5)
2. 聚焦您的样品
为确保光圈在光路中的正确位置,请聚焦样品,作为其他光学调整的起点。
![柯勒照明调校过程中样品的聚焦图像](https://static5.olympus-lifescience.com/modules/imageresizer/de8/549/45e4717eb2/288x304p144x152.jpg)
3. 关闭视场光阑
聚焦样品后,完全关闭视场光阑。 如果尚未聚焦,则调整聚光镜的高度,直到视场光阑的边缘尽可能清晰,与样品的焦点匹配。
![显示如何关闭用于柯勒照明的视场光阑的示意图](https://static4.olympus-lifescience.com/data/Image/blog-images/2022/01/illumination/Koehler_close_field_stop.png?rev=3017)
4. 为视场光阑调中
接下来,调整视场光阑的位置,使其位于显微镜图像的中心。 使用聚光镜前部的两个旋钮调整视场光阑的XY位置。
要检查中心位置,请打开视场光阑,直到看到八角形的边缘到达视场的边缘。 根据需要进行调整。
![显示如何为柯勒照明进行视场光阑调中的示意图](https://static4.olympus-lifescience.com/data/Image/blog-images/2022/01/illumination/Koehler_center_field_stop.png?rev=C3EB)
5. 调整孔径光阑
获得图像后,调整孔径光阑,以控制对比度和分辨率。 您可以使用伯特兰透镜或类似的光学元件来观察后焦面。 您应该为它填充大约75%的视野。
孔径光阑过宽(左)、最佳设置(中)和过小(右)时的图像质量比较。
6. 从视野中清除视场光阑
最后,适当打开视场光阑,使其刚好位于视野之外。 避免将其完全打开,因为这会降低图像质量。
就是这么简单! 现在,您将拥有一个均匀、明亮的照明视场,可以获得高质量的显微镜图像!
如果您有兴趣深入研究柯勒照明,请查阅我们的显微镜资源中心入门指南,其中对这项技术作了详细探究。