Eine helle, gleichmäßige Mikroskopbeleuchtung erfordert mitunter mehr als nur das Einschalten der Lichtquelle. Da Mikroskope hochentwickelte optische Systeme sind, müssen sie sorgfältig angepasst werden, um sicherzustellen, dass sie Bilder in optimaler Qualität erzeugen. Eine der einfachsten optischen Ausrichtungen ist das Einstellen der Beleuchtung nach Köhler für Durchlicht-Hellfeldbilder.

Der Ausrichtungsprozess für die Köhler-Beleuchtung ist für aufrechte und inverse Mikroskope gleich, aber die Positionen des Kondensors und der Leichtfeldblende und der Aperturblende variieren von Mikroskop zu Mikroskop. Diese Komponenten sind im Handbuch des jeweiligen Mikroskops beschrieben.

Expertentipp: Stellen Sie sicher, dass Ihre Optik sauber ist, bevor Sie mit diesem Vorgang beginnen. Ein verschmutztes Objektiv kann das Köhlern unnötig erschweren.

1. Verwenden Sie ein Objektiv mit geringer Vergrößerung.

Wenn Sie Ihr Mikroskop auf ein Objektiv mit geringer Vergrößerung umstellen, z. B. 10-fach, erhalten Sie ein weites Sehfeld und eine große Schärfentiefe.

2. Stellen Sie Ihre Probe scharf.

Um die richtige Position der Blenden im Strahlengang sicherzustellen, stellen Sie als Ausgangspunkt für die restlichen optischen Einstellungen als Erstes die Probe scharf.

3. Schließen Sie die Leuchtfeldblende.

Sobald die Probe im Fokus ist, schließen Sie die Leuchtfeldblende vollständig. Ist sie nicht im Fokus, stellen Sie die Höhe des Kondensors ein, bis die Ränder der Leuchtfeldblende so scharf wie möglich sind und mit dem Fokus der Probe übereinstimmen.

4. Zentrieren Sie die Leuchtfeldblende.

Stellen Sie dann die Position der Leuchtfeldblende so ein, dass sie sich in der Mitte des Mikroskopbilds befindet. Verwenden Sie die beiden Drehknöpfe an der Vorderseite des Kondensors, um die XY-Position der Leuchtfeldblende einzustellen.

Um die mittige Position zu prüfen, öffnen Sie die Leuchtfeldblende, bis die Kanten des Achtecks den Rand des Sehfelds erreichen. Nehmen Sie gegebenenfalls Anpassungen vor.

5. Stellen Sie die Aperturblende ein.

Sobald ein Bild erzeugt wurde, stellen Sie die Aperturblende ein, um den Kontrast und die Auflösung zu optimieren. Sie können eine Bertrandlinse oder eine ähnliche Optik verwenden, um die hintere Fokusebene sichtbar zu machen. Es sollten etwa 75 % des Sehfelds ausgefüllt sein.

Vergleich der Bildqualität bei zu großer (links), optimal eingestellter (Mitte) und zu kleiner Blende (rechts).

6. Bewegen Sie die Leuchtfeldblende aus dem Sehfeld.

Öffnen Sie abschließend die Leuchtfeldblende, sodass sie knapp außerhalb des Sehfelds liegt. Vermeiden Sie es, sie vollständig zu öffnen, da dies Ihr Bild verschlechtert.

Das ist alles! Jetzt haben Sie ein gleichmäßiges, helles Beleuchtungsfeld für qualitativ hochwertige Mikroskopiebilder!

Weitere ausführliche Informationen zur Köhler-Beleuchtung finden Sie unter Microscope Resource CenterPrimer.

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