세포 계수–스페로이드 내 세포 수 측정

세포 이미징 분석 시스템과 결합된 컨포칼 관찰을 통해 사용자는 스페로이드의 횡단면 이미지를 사용하여 내부에 존재하는 세포 수를 계산할 수 있습니다.

목적

세포 수를 파악하는 것은 세포 분석에 중요한 매개변수의 하나로 스페로이드 분석에 매우 중요한 기준이 됩니다. 혈구계를 사용한 세포 계수는 트립신에 의한 스페로이드 분해를 사용하여 준비된 세포 현탁액이 필요합니다. 하지만 이 경우 3D 구조에서 비롯된 스페로이드의 기능이 상실됩니다. 본 연구에서는 다음과 같이 스페로이드에 대해 비파괴 세포 계수를 수행하였습니다. 즉 세포 분석 시스템의 사용과 결합된 컨포칼 관찰을 통해 스페로이드의 횡단면 이미지의 세포 수를 측정하였습니다. 그 결과를 혈구계를 사용하여 획득된 결과와 비교하였습니다.

샘플 제공

HeLa 또는 HT-29의 세포 현탁액을 500개 세포/웰로 PrimeSurface® 96U plate(SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) 파종하였습니다. 세포 배양 시작으로부터 48시간 후 각 스페로이드를 거두어들였습니다. 모든 스페로이드의 1/2을 4% 포르말린으로 고정시키고 뒤이어 하룻밤 동안 Hoechst 33342 및 투명화 1로 착색하였습니다. 모든 스페로이드의 나머지 부분은 세포 현탁액을 준비하기 위해 하룻밤 동안 트립신으로 처리되었습니다.

1) Susaki 등 세포. 2014 Apr 24;157(3):726-39. doi: 10.1016/j.cell.2014.03.042. Epub 2014 Apr 17.

결론
세포 분석 시스템 및 혈구계를 사용한 세포 계수

p>시스템을 사용하여 상기 스페로이드의 형광 이미지를 획득하였습니다. (Ex: 405nm, Em: 488nm). 세포를 계산하기 위해 시스템이 20μm마다 스페로이드의 횡단면 이미지를 획득한 후 가시 세포를 식별하고 계산합니다(그림 1^*). 다음으로 각 핵의 수를 함께 추가하여 전체 스페로이드 내의 세포 총수를 추정합니다(시스템 계수). 그림 2(bars: SD, n=6)에 표시된 바와 같이 그 결과를 혈구계(수동 계수)를 사용하여 획득된 결과와 비교하였습니다. 이러한 결과는 시스템이 트립신을 사용하여 스페로이드를 분해할 필요 없이 구조적 온전함을 유지하면서 스페로이드에 대한 세포 계수를 수행할 수 있음을 보여주었습니다.

PrimeSurface는 Sumitomo Bakelite Co., Ltd의 등록 상표입니다.
Olympus는 등록 상표이며 NoviSight 및 Insightful Analysis, Intelligent Answers는 Olympus Corporation의 상표입니다.

* 비록 헬라 세포가 의료 연구에서 가장 중요한 세포주가 되었다고 해도, 과학에 대한 Henrietta Lacks의 공헌이 동의를 받지 않은 것이었다는 것을 인정해야만 합니다. 이로 인해 면역학, 전염병, 암에 대한 중요한 발견이 이루어졌지만 사생활, 윤리, 의학적 동의에 대한 중요한 논의도 촉발되었습니다.
Henrietta Lacks의 삶과 현대 의학에 대한 그녀의 공헌을 알아보려면 여기를 클릭하세요.
http://henriettalacksfoundation.org/