생명과학 솔루션
애플리케이션 노트

세포 계수–스페로이드 내 세포 수 측정


세포 이미징 분석 시스템과 결합된 컨포칼 관찰을 통해 사용자는 스페로이드의 횡단면 이미지를 사용하여 내부에 존재하는 세포 수를 계산할 수 있습니다.

목적

세포 수를 파악하는 것은 세포 분석에 중요한 매개변수의 하나로 스페로이드 분석에 매우 중요한 기준이 됩니다. 혈구계를 사용한 세포 계수는 트립신에 의한 스페로이드 분해를 사용하여 준비된 세포 현탁액이 필요합니다. 하지만 이 경우 3D 구조에서 비롯된 스페로이드의 기능이 상실됩니다. 본 연구에서는 다음과 같이 스페로이드에 대해 비파괴 세포 계수를 수행하였습니다. 즉 세포 분석 시스템의 사용과 결합된 컨포칼 관찰을 통해 스페로이드의 횡단면 이미지의 세포 수를 측정하였습니다. 그 결과를 혈구계를 사용하여 획득된 결과와 비교하였습니다.

목적

샘플 제공

HeLa 또는 HT-29의 세포 현탁액을 500개 세포/웰로 PrimeSurface® 96U plate(SUMITOMO BAKELITE CO., LTD) 파종하였습니다. 세포 배양 시작으로부터 48시간 후 각 스페로이드를 거두어들였습니다. 모든 스페로이드의 1/2을 4% 포르말린으로 고정시키고 뒤이어 하룻밤 동안 Hoechst 33342 및 투명화 1로 착색하였습니다. 모든 스페로이드의 나머지 부분은 세포 현탁액을 준비하기 위해 하룻밤 동안 트립신으로 처리되었습니다.

1) Susaki 등 세포. 2014 Apr 24;157(3):726-39. doi: 10.1016/j.cell.2014.03.042. Epub 2014 Apr 17.

결론
세포 분석 시스템 및 혈구계를 사용한 세포 계수

시스템을 사용하여 상기 스페로이드의 형광 이미지를 획득하였습니다. (Ex: 405nm, Em: 488nm). 세포를 계산하기 위해 시스템이 20μm마다 스페로이드의 횡단면 이미지를 획득한 후 가시 세포를 식별하고 계산합니다(그림 1). 다음으로 각 핵의 수를 함께 추가하여 전체 스페로이드 내의 세포 총수를 추정합니다(시스템 계수). 그림 2(bars: SD, n=6)에 표시된 바와 같이 그 결과를 혈구계(수동 계수)를 사용하여 획득된 결과와 비교하였습니다. 이러한 결과는 시스템이 트립신을 사용하여 스페로이드를 분해할 필요 없이 구조적 온전함을 유지하면서 스페로이드에 대한 세포 계수를 수행할 수 있음을 보여주었습니다.

결론

PrimeSurface는 Sumitomo Bakelite Co., Ltd의 등록 상표입니다.
Olympus는 등록 상표이며 NoviSight 및 Insightful Analysis, Intelligent Answers는 Olympus Corporation의 상표입니다.

이 애플리케이션에 사용되는 제품

3D 세포 분석 소프트웨어

NoviSight

  • 전체 구조에서 아세포까지 3D 이미지 인식
  • 통계 분석
  • 다양한 기본 분석

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