세포 생존율에 영향을 미치지 않고 고품질 이미지를 획득해야 하기 때문에 형광 라이브 셀 이미징이 어려울 수 있습니다. 하지만 올바른 현미경 도구 및 기법을 사용하면 성공적인 실험을 수행하고 확실한 이미지 데이터를 얻을 수 있습니다.
다음은 원하는 형광 라이브 셀 이미징 결과를 얻는 6가지 팁입니다.
1. 이미징 요구에 맞는 현미경을 찾습니다.
라이브 셀 이미징에 관한 한, 모든 현미경이 똑같이 형성되는 것은 아닙니다. 예를 들어 도립 현미경은 샘플 아래에서 이미지를 획득하기 때문에 라이브 셀 이미징에 잘 작동합니다. 따라서, 개구수(NA)가 가장 높은 대물렌즈에 필요한, 살아 있는 표본에 대물렌즈를 더 가까이 둘 수 있습니다.
2. 커버슬립 유리 바닥 배양 접시를 사용합니다.
플라스틱 바닥 접시는 자가형광을 야기하고 신호-노이즈 비율(S/N 비)을 저하시킬 수 있습니다. 이런 이유로 라이브 셀 형광 이미징 실험 중 가능하면 항상 커버슬립 유리 바닥 배양 접시를 사용하는 것이 중요합니다.
3. 투과율이 높은 형광 필터를 사용하여 S/N 비를 향상시킵니다.라이브 셀 형광 이미징 실험용 하드웨어의 가장 중요한 부품의 하나는 형광 필터 큐브와 그 안에 있는 필터입니다. 되도록 많은 형광 신호를 모을 수 있도록 투과율이 높은 필터를 찾습니다. 이를 통해 노출 시간이 단축되어 광퇴색과 광독성이 줄어듭니다. 또한 Olympus 필터 큐브에는 큐브 내 미광의 양을 줄이고 최종 이미지의 S/N 비를 향상시키는 특수 코팅이 들어 있습니다. |  Olympus 필터 큐브 |
4. 개구수가 높은 대물렌즈를 사용하여 더 많은 빛을 모으고 노출 시간을 줄입니다.
노출 시간을 줄이는 또 하나의 좋은 방법은 개구수가 높은 대물렌즈를 사용하는 것입니다. 이러한 대물렌즈는 동일한 배율에서 개구수가 더 낮은 대물렌즈보다 더 많은 빛을 모읍니다. 이렇게 하면 노출 시간이 훨씬 더 줄어들어서 형광으로 장기 라이브 셀 실험 중 세포 건강이 향상됩니다.
Olympus X 라인 40X 오일 대물렌즈
5. 실험 요구를 위한 배양 모델을 최적화합니다.
현재 다양한 현미경 배양기가 시판되고 있습니다. 스테이지 상단 또는 전체 현미경 인클로저 사용 여부와 관계없이 배양기가 습도 및 적정 가스 농도 수준을 제공하는 기능을 비롯하여 라이브 셀의 모든 요구를 충족해야 합니다
일부 배양 인클로저에는 S/N 비 향상에 도움이 되도록 현미경의 실내광 수집을 방지하는 블랙아웃 패널이 딸려 있습니다.
6. 초점 유지 장치를 사용하여 정확한 초점 위치를 얻는 데 필요한 Z 프레임의 수를 줄입니다.
살아 있는 샘플이 이리저리 움직이기 때문에 타임 랩스 실험 중에 초점을 적절히 캡처할 수 있는 것이 중요합니다.
Z 스태킹을 통해 시점당 여러 조명에 샘플을 노출하기 보다는 TruFocus Z-드리프트 보상 모듈 같은 편차 보상 장치를 사용하여 타임 랩스 실험 중 초점을 유지합니다.
Olympus TruFocus Z-드리프트보상기
