A formação de imagem de fluorescência de células vivas pode ser complicada, pois você precisa obter imagens de alta qualidade sem afetar a viabilidade da célula. Contudo, com as ferramentas e as técnicas de microscopia corretas, você pode executar um experimento bem-sucedido e obter dados de imagem confiáveis.

Estas são seis dicas para obter bons resultados de formação de imagem de fluorescência de células vivas.

1. Encontre o microscópio certo para as suas necessidades de formação de imagem.

Quando se trata de formação de imagem de células vivas, nem todos os microscópios são criados igualmente. Por exemplo, os microscópios invertidos funcionam bem na formação de imagem de células vivas porque formam imagens a partir de baixo da amostra. Isto permite que as lentes objetivas se aproximem do espécime vivo, o que é necessário para a maioria das lentes objetivas com alta abertura numérica (AN).

2. Use placas para cultura de lamela com fundo de vidro.

As placas com fundo de plástico podem causar autofluorescência e degradar a sua relação sinal-ruído (relação S/R). Por esses motivos, é importante usar placas para cultura de lamela com fundo de vidro sempre que possível durante experimentos de formação de imagem de fluorescência de células vivas.

3. Use filtros de fluorescência com altas taxas de transmissão para melhorar a relação S/R. Uma das peças de equipamentos mais importante para experimentos de formação de imagens de fluorescência de células vivas é o cubo de filtro de fluorescência e os filtros que se encontram nele. Procure filtros com altas taxas de transmissão para que você possa coletar o máximo possível do sinal de fluorescência. Isso permite tempos de exposição mais curtos, o que reduz o fotobranqueamento e a fototoxicidade. Os cubos de filtro da Olympus também contêm um revestimento especial que reduz a quantidade de luz difusa dentro do cubo e melhora a relação S/R final das imagens.

Cubo de filtro da Olympus

4. Use lentes objetivas com alta AN para coletar mais luz e reduzir os tempos de exposição.

Outra excelente forma de reduzir os tempos de exposição é usar objetivas com ANs altas. Estas objetivas coletarão mais luz do que as suas equivalentes de AN menor com a mesma ampliação. Isso ajuda a reduzir ainda mais os tempos de exposição, resultando em melhor saúde da célula durante experimentos de células vivas de longo prazo com fluorescência.

Objetiva de óleo X Line de 40X da Olympus

5. Otimize os modelos de incubação para as necessidades do seu experimento.

Uma vasta gama de incubadoras de microscópio está disponível no mercado atualmente. Seja usando os invólucros da platina ou do microscópio completo, certifique-se de que a sua incubadora atenda a todas as necessidades das suas células vivas, incluindo a capacidade de fornecer níveis de umidade e de concentração de gás adequados.

Alguns dos invólucros de incubação possuem até painéis de blecaute que impedem que o microscópio colete luz ambiente, ajudando a melhorar a relação S/R.

6. Use dispositivos de manutenção do foco para reduzir o número de quadros Z necessários para alcançar a posição focal correta.

Visto que as amostras vivas se movem, é importante garantir que o foco pode ser capturado adequadamente durante experimentos de intervalo de tempo.

Em vez de expor as suas amostras a diversas iluminações por ponto de tempo através do empilhamento de foco, use um dispositivo de compensação de desvio como o nosso módulo de compensação de desvio Z TruFocus e ele irá ajudá-lo a manter o foco durante experimentos de intervalo de tempo.

Compensador de desvio Z TruFocus da Olympus

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