激光扫描共聚焦显微镜
激光共聚焦扫描显微镜
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FLUOVIEW FV3000系列的设计目的是迎接现代科学中所提出的艰巨的挑战。FV3000系列产品具有完成活细胞和组织成像所需的高灵敏度和高速度，从而可以为细胞、组织和较小的生物体完成2D到6D（x,y,z,t,λ,p）的从宏观到微观的成像操作。FV3000系列产品有一个直观的且可以调整的用户界面，可支持从图像采集到图像处理和分析的整个工作流程。在研发FV3000产品时，我们特别注意要满足细胞生物学、肿瘤研究以及干细胞研究的需要。现在FV3000系列又新添了两款正置配置，还可以随时满足神经科学、电生理学和发育生物学的需要。
激光扫描共聚焦显微镜
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用户可以选择两种不同类型的扫描单元：仅配常规扫描振镜的FV3000，或者配有常规/共振混合式扫描的FV3000RS。 混合式扫描单元配有用于高精度扫描的常规扫描振镜，以及非常适合高速成像的常规/共振扫描振镜。常规扫描振镜可让奥林巴斯超高分辨率技术(FV-OSR)获得低至120nm的分辨率以及高信噪比，并且具有精确的龙卷风和多点刺激以及100ms切换速度。 常规扫描振镜能够在2X变焦条件下每秒获取16帧图像。 共振扫描振镜的扫描速度范围为从512 x 512每秒30帧，到512 x 32每秒438帧。
不存在速度与视场之间的妥协
许多高速扫描方法存在对视场的限制，因此限制了其在多细胞大面积检测方面的使用。 FV3000系列产品的共振扫描振镜甚至在每秒30帧的视频速度情况下亦可保持全1X视场。甚至在每秒438帧的速度下通过裁剪Y轴获得更高速度。
大多数共振扫描振镜只能在速度与视场之间做出妥协。 经过优化的FLUOVIEW系统可确保视场与信号强度之间无需妥协，因此可在细胞和组织的大背景下观察动态样本（如钙成像）。
上图显示为其他系统所要求的放大倍率示例。
Loading the player… FV3000: 血流视频 |
小鼠血管内血小板结合形成血栓。 利用配有2通道 GaAsP光电倍增管的共振扫描单元以全帧每秒30帧获得的图像。
图像数据由 Takuya Hiratsuka博士， Michiyuki Matsuda博士提供，京都大学生命科学研究生院。 |
甲醇固定的A431细胞，使用Abcam ERK1抗体 + ERK2抗体 (Alexa Fluor 488) ab208564，以及α微管蛋白抗体(Alexa Fluor 594) ab195889和DAPI标识。 样本由Abcam提供。
活细胞成像的优化
与标准常规振镜扫描通过避免荧光激发转化为产生活性氧的三重态方法相比，共振扫描极大地降低了光漂白和光毒性。 这些特点让活细胞实验更加稳健可靠。FV3000系列产品具备全面的高低范围激光强度控制功能，系统可在样本上使用最低规定量的激光功率。 选配激光功率监视器可在多日长时间延时成像过程中确保连续一致的激光功率。
FV3000系列产品采用了奥林巴斯的TruSpectral检测概念。 基于专利* 体相位全息
(VPH) 透射光栅和控制光线的可调式狭缝，FV3000和FV3000RS的光谱检测具有较高效率，可让使用者将每个单独通道的探测波长选定为1nm。
* US8530824B/JP5541972B/EP2395380A
高灵敏度光谱检测器(HSD)能够观察由于过于不明显而无法使用传统型设备观察的样本。 GaAsP光电倍增管具有最大量子效率45%的2个通道，Peltier制冷可让高S/N比例图像在极低激发光照射下背景噪声降低20%。
FV3000系列产品将全系统传输效率提升到新的层面，让每个系统均具有全面光谱，提高总体灵敏度，并提高信噪比，实现多色彩共焦成像的改进提升。
TruSpectral高效率的设计和软件可让光谱检测器在多通道波长模式下以阵列模式进行实时光谱拆分和后处理光谱拆分。 多通道模式有助于在活细胞实验过程中确保一致的光谱拆分，以及在图像获取过程中分割复杂的荧光。 利用阵列4个不同通道的4种不同动态范围，不论明亮还是微弱的光谱信号均可通过调整每个检测器的灵敏度进行独立分割。
可定制、可保存的布局能够轻松按工作流程和实验需求实现从简单到复杂的界面定制。
布局
从选择操作特定工具的偏好布局开始，实现从简单到复杂的图像获取。
获取条件
重新加载上次实验的完美配置，获得前后一致性。
获取
通过活动比例、 强度调节显示、量化兴趣区（ROI）图形绘制或光谱拆分显示实现从简单到复杂的图像获取，并提供数据备份功能提高安全性。
查看器
回顾已经生成的数据。 生成3D和4D图像和动画，实现深层次的探索和共享。
分析
利用在线和离线处理从图像中提取数据。 分析工具包括奥林巴斯超高分辨率技术 (FV-OSR)和具有诸如反卷积、筛选、计数和测量以及一键批量处理功能的强大cellSens软件。
TruSpectral探测能力外加多通道模式意味着在图像获取过程中就可实现现场光谱拆分，实现复杂叠加光谱的实时处理。
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CFP (内涵体，蓝色)，mAmetrine (质膜，绿色)，mKO (细胞核，橙色) 和 mKeima (纤维状肌动蛋白，紫色) 在延时成像过程中，拆分之前的活动图像。
图像数据由 Kazuhiro Aoki博士、 Michiyuki Matsuda博士提供，京都大学医学研究生院。 |
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实时盲拆分图像
图像数据由 Kazuhiro Aoki博士、 Michiyuki Matsuda博士提供，京都大学医学研究生院。 |
轻松处置复杂方案，并且实时控制可让微秒精度扫描在多日延时过程中获得毫秒级精度。
微孔板成像对于诸多应用非常重要，孔导航器可为各类细胞培养器皿和定制板提供复杂、直观的控制。 多区域延时和拼接能够获得稳健精确的延时数据。
显微镜在出厂时即配有硬盘驱动器(HDD)记录功能。 所捕捉的图像可自动保存在硬盘驱动器(HDD)内。 诸如从长期延时成像获得的大量数据均可保存。
仅仅是成像还不够; 利用集成cellSens软件的计数和测量分析功能，FV3000系列产品能够进行图像反卷积优化，并使用一键批量处理功能对各种形态学测量进行分析。
表达Fucci2 NMuMG细胞系的球状团块图像。图像提供方：Atsushi Miyawaki，日本理化学研究所脑科学研究中心细胞动力学实验室。
FV3000RS在软件中包含 强度调节显示（IMD）功能，可在标准及高速图像获取过程中显示量化荧光比例的变化。当纯比例显示无法在背景区获得良好的对比时，该功能对于钙和FRET成像特别有用。
tsGFP1-mito揭示了HeLa细胞中线粒体生热作用的不均匀性。CCCP 37 °C处理前后tsGFP1-mito表达细胞中的比例图像(ex 405 nm/ ex 488 nm)。 比例尺显示10 μm (全图) 和 3 μm (插图)。图像提供方：Shigeki Kiyonaka博士，Yasuo Mori博士，京都大学合成化学系和生物化学系分子生物学研究室。
图像数据提供方：Yusuke Nino和Atsushi Miyawaki，日本理化学研究所脑科学研究中心细胞动力学实验室。
为避免光毒性以较低激光功率进行高速扫描往往会降低信噪比。 通过采用循环平均后处理方式，使用者能够在确保时间比例并保持原始数据的同时获得调整高速延时图像的灵活性。
(左) 以较低激光功率获取的原始每秒30帧数据 (0.05 %，488 nm). (右) 对以较低激光功率获取的每秒30帧数据的循环平均处理(10帧) 。
选配约束迭代 (CI)反卷积解决方案采用先进的CI算法实现更高分辨率、相差、以及动态范围，并且达到业内领先的速度。这种专有后处理工具足以应用于CCD和共焦成像，且提升了区分成像目标的能力。
细胞谱系：人宫颈癌细胞谱系HeLa细胞的免疫染色：Hec1染色（绿色，Alexa Fluor-488)，α微管蛋白染色 (红色，Alexa Fluor-568)，DAPI 染色（蓝色）由人宫颈癌获得的有丝分裂HeLa细胞。有丝分裂纺锤体和着丝粒分别采用α微管蛋白抗体 (红色) 和Hec1抗体 (绿色)染色。 染色体通过着丝粒，在染色体着丝粒区装配的蛋白结构与构成有丝分裂纺锤体的微管进行交互作用。
图像提供方：Masanori Ikeda和Kozo Tanaka， 东北大学，发育、衰老与癌症学院，分子肿瘤学系。
奥林巴斯应用范围宽广的超高分辨率解决方案对荧光探针没有特殊要求，可用于各种样本。
作为共定位分析的理想选择，FV-OSR能够以大约120nm的分辨率顺序或同步获取4个荧光信号*，几乎达到常规共焦显微技术分辨率的2倍。
该系统使用方便，用户培训要求极低，并可添加到任何共焦系统内，这让FV-OSR成为实现超高分辨率真正可行的方法。*取决于物镜倍率、数值孔径、激发和发射波长、以及实验条件。
标记 GFP (Alexa Fluor 488，神经元) 和SV2 (Alexa Fluor 565，红色)的二次抗体。 样本由 Ed Boyden博士和 Fei Chen博士提供，麻省理工学院。
找到样本中的感兴趣区域并非易事。 FV3000系列产品的共聚焦光学设计可支持宏观到微观成像，因此使用者能够快速从1.25物镜的低倍率观察切换到最大150X物镜的高倍率详细观察。 使用者在宏观或微观层面利用图像拼接可生成在背景内显示样本的总览图像。
成年YFP-H 小鼠大脑冠状面(30 μm厚)的拼接图像，使用20X 物镜(UPLSAPO20X)获取.
图像提供方： Takako Kogure和Atsushi Miyawaki，日本理化学研究所脑科学研究中心细胞动力学实验室。
奥林巴斯可提供四种能够获得优良活细胞成像效果的高数值孔径硅油浸入式物镜。 硅油的折射率 (ne ≈ 1.40) 与活组织的折射率 (ne ≈ 1.38)接近，这让活组织深部高分辨率观察能够把因折射率不匹配造成的球面像差降到最低。 硅油不会干燥或硬化，因此无需加油，这让其成为扩展延时观察的理想选择。
UPLSAPO30XS: 适用于更宽视野和更大深度
倍率: 30X，NA: 1.05 (硅油浸入式)，W.D.: 0.8 mm，
盖玻片厚度: 0.13 - 0.19 mm，工作温度: 23 - 37 °C
UPLSAPO40XS : 全面的倍率范围
倍率: 40X，NA: 1.25 (硅油浸入式)，W.D.: 0.3 mm，
盖玻片厚度: 0.13 - 0.19 mm，工作温度: 23 - 37 °C
UPLSAPO60XS2:适用于优良分辨率的3D观察
倍率: 60X，NA: 1.30 (硅油浸入式)，W.D.: 0.3 mm，
盖玻片厚度: 0.15 - 0.19 mm，工作温度: 23 - 37 °C
UPLSAPO100XS: 适用于在精确界定区域内进行更大深度的观察
倍率: 100X，NA: 1.35 (硅油浸入式)，W.D.: 0.2 mm，
盖玻片厚度: 0.13 - 0.19 mm，工作温度: 23 - 37 °C
在深层组织观察中，图像质量取决于确保样本与浸液的折射率尽可能彼此接近。在采用硅油浸入式物镜时，样本与硅油的折射率差别极小。 因此能够在深层组织上以较高分辨率获得明亮的荧光图像。
这种油浸入式物镜将405 - 650 nm光谱范围的侧向与轴向色差降低到最低限度。 共定位图像能够得到可靠获取，且以优良定位精度对图像进行测量。 该物镜还可通过最大850nm的近红外光谱对色差进行补偿，这让其成为量化成像的理想选择。
低色差物镜
倍率: 60X
NA: 1.4 (油浸入式)
W.D.: 0.12 mm
色差补偿范围: 405 - 650 nm
每个物镜均提供光学数据。
PLAPON60XOSC2和UPLSAPO60XO的性能对比
安装在物镜转盘附近的Z-传动导向件将较高的热硬度与环绕式结构的稳定性结合一体，大幅度降低了热和振动的影响，改善了延时成像的品质。
umbra装置专为荧光观察而特别设计。 其能够有效阻挡室内光线，提高荧光对比，并可在明亮条件下获得清晰的荧光观察效果。
混合式扫描单元(共振/³£¹æ振镜)
该混合式扫描器将常规扫描振镜与共振扫描结合在一起，能够以全视场每秒30帧速度以及512 x 32每秒最大438帧的速度实现高速成像。 顺序管理器让同一实验内共振扫描和常规振镜成像之间的自动切换更加简单。
常规振镜扫描单元
仅配有常规振镜的扫描器能够以 512 x 512实现从每秒1帧到每秒16帧的精确扫描。 高速多点刺激或检测实验能够以超过100 Hz频率在多个细胞之间进行，并且以高达500 kHz的频率输出数据。
采用 TruSpectral技术的高灵敏度光谱检测器 (GaAsP光电倍增管)
该2通道高灵敏度光谱检测器(HSD) 采用与光谱检测器(SD)相同的体相位全息光栅(VPH)技术，使用 Peltier制冷GaAsP 光电倍增管，量子效率可高达45 % 且可检测范围达到750 nm。 该设备可结合 2通道光谱检测器 (SD)使用，以获得灵活的动态范围，也可配合第二台2通道高灵敏度光谱检测器(HSD) 使用，获得强大的4通道灵敏度。
采用 TruSpectral技术的光谱检测器 (多碱光电倍增管)
该2通道光谱检测器采用高效率的VPH透射光栅，检测波长范围400 - 800 nm，1 - 100 nm 带宽可调式狭缝。这种多碱光电倍增管（PMT）能够实现最大800 nm的宽广动态范围。
主激光耦合器
主激光耦合器是激光系统的核心部件。 四束标准激光，并可添加第五束激光，或留出一个开放端口用于通过副激光耦合器添加额外三束二极管激光器。
副激光耦合器
任何时候均可为该选配耦合器添加最多3个二极管激光器，结合主激光耦合器达到最大7根激光线路。
传统型照明模块设计用于长持续时间的延时实验。 由于光可通过光纤传输系统导入，因此热量不会传送到显微镜。
光源/U-HGLGPS
经过预对中的荧光照明光源无需调整，并且平均使用寿命可达2000小时。
透射光检测器/FV31-LETD
该装置采用外置透射光光电倍增管检测器和LED传统型照明，激光扫描和传统透射光Nomarski DIC观察均可使用。 使用者可进行同步多通道共聚焦荧光成像和透射光DIC获取。
从以下选配方案选择可现场升级的激光自动对焦、快速精确的电动载物台控制、模拟输入/输出和TTL同步的、以及方便的防震平台。
Z轴漂移补偿系统/IX3-ZDC2
IX3-ZDC2采用光毒性极小的红外光（1级激光）探测样本平面位置。 单次自动对焦 (AF)模式可根据需要对较深样本设定多个焦点位置，实现多位置实验的高效 Z-stack获取。 连续AF模式可确保所感兴趣的观察面精确位于焦点上，避免了因温度变化或添加试剂导致的焦点漂移，这让其成为对焦要求更为严苛测量的理想选择。另外，光学补偿的增加让针对塑料器皿或使用干燥物镜的连续自动对焦成为可能。 IX3-ZDC2还可兼容硅油浸入式物镜使用（以AF模式）。
IX3/IX3-SSU的超声波载物台
超声波载物台具有改善精度的低热漂移特性，并能够使用软件和触摸屏进行控制，方便获得快速、可靠的多区域成像。
IO接口盒/FV30-ANALOG
该设备可通过模拟输入支持电生理实验，并支持TTL I/O。 接口盒可将电压转换为能够以与荧光图像相同方式处理的图像。
简易防震台/FV31-AVP
这种简易防震台与FV3000的占用空间相适应，是无需全防震工作台应用的紧凑空间解决方案。
安装通常仅需一天时间，快速实现系统的启动和运行。 我们利用全球知识库为产品提供服务支持。 奥林巴斯应用专员可帮助您选择能够根据应用情况优化系统的功能特性。 共聚焦系统是资产投资，确保系统以最佳性能运行非常重要。 我们的认证服务团队可快速安排调整规程和系统诊断，让您的系统保持在最佳状态，并排查任何问题。
FV3000激光扫描共聚焦显微镜与从1.25X到150X倍率的各种物镜相兼容，不仅可以获得宏观的预览图像，还可以获得微观的高分辨率图像。在实验中，先获取整个脑组织切片的图像，以轻松地辨别感兴趣区域，然后再切换到高放大倍率物镜，以获得目标神经元的高分辨率图像。使用奥林巴斯的超分辨率技术，甚至可以观察到树突棘的微细结构。
FV3000系列显微镜通过使用TruSpectal全真光谱检测技术，可以获得使用多种颜色标记的神经元图像，并清晰地区分单个的光谱。
半个冠状小鼠脑片在显微镜下拍摄的图像。二抗标记的是GFP（Alexa Fluor 488，绿色）、SV2（Alexa Fluor 565，红色）和Homer（Alexa Fluor 647，蓝色）。样本由Ed Boyden博士和Fei Chen博士提供，麻省理工学院。
树突标记（GFP抗体，Alexa Fluor 488，绿色）和突触标记（SV2，Alexa Fluor 565，红色）。由奥林巴斯cellSens软件的高级受限迭代反卷积功能处理的超分辨率图像。平均半峰宽测量 —135 nm。图像使用100X，1.35 NA硅油浸入式物镜采集。样本由Ed Boyden博士和Fei Chen博士提供，麻省理工学院。
这种配置为用户提供了更大的工作空间，因此物镜周围可以有更多的空间放置电生理学设备。通过降低载物台的高度还可以增加更多的空间，以更好地完成涉及到大样本的实验。通过使用共振扫描振镜，可以每秒钟438帧的速度对快速发生的现象完成图像采集的操作，如：与神经元信号传输相关的钙离子动力学。
通过数字模拟同步器，用户可以同步进行图像采集和电生理学实验。此外，用户还可以使用远程软件开发套件，通过单个软件平台对FV3000显微镜和电生理学设备进行控制。
细胞生物学要求使用灵敏度很高的成像系统，以降低活生物体如斑马鱼和线虫等受到的光毒性。对较大的组织碎片和较小的有机体进行成像操作，可能同样既需要高速度又需要大视场，这样才可以在背景下观察到整个有机体。要实现这个目标，需要有精确的自动化技术和优质的光学器件。FV3000系统的设计目的是通过借助以下功能对较大组织和较小有机体进行成像操作：精确控制载物台，图像拼接，以及可以实现极低放大倍率到高放大倍率的（从1.25X升至150X）的光学设计。为了便于从检测信号中去除自发荧光，这款全光谱系统的标准配置中包含有高级光谱拆分软件，可以将自发荧光和叠加光谱区分开来（例如：GFP/YFP）。
小型有机体通常被用作研究活体动力过程的模型，如：血流动力学、跳动的心脏和钙信号，因此FV3000RS配有非常精确的共振扫描振镜，以在每秒钟438帧的速度下完成对这些动态活动的成像操作。通过循环平均处理功能，用户可以使激光功率保持在较低的水平，以避免产生光毒性，提高信噪比，并保持最初的时间分辨率。在FRET和钙成像等应用中，比例成像分析功能可采用强度调节显示（IMD）功能，这样就可以突出显示真正的信号，而弱化背景噪声。
当需要完成高分辨率成像操作时，用户可以通过一键式鼠标点击的方式，在高精度常规扫描振镜和高速度共振扫描振镜之间切换。共振扫描振镜使用与常规扫描振镜相同的视场，因此用户可以在高速度扫描和高精度扫描之间自由切换，而不用担心丢失视场信息。
在体外培养的心肌细胞的自发性收缩过程中对CFP/YFP的比例结果进行的强度调节显示。图中的活细胞上显示有多个时间点。来自细胞内感兴趣区域的比率的量化图形结果显示如下。
图像数据由Yusuke Nino和Atsushi Miyawaki提供，细胞功能动力学实验室，日本理化学研究所脑科学研究中心。
FV3000系列产品可提供强大的肿瘤研究成像应用所需要的技术。在肿瘤活细胞研究中，灵敏的荧光检测、优异的光学性能，以及细胞计数和分类等分析功能都十分重要。随着微流控技术的出现以及对循环肿瘤细胞的关注，是否可以高速采集图像就成为实验成败的关键因素。
细胞研究中，准确性和重复性都十分重要。例如，细胞周期检验点的追踪必须准确可靠；在三维成像研究中，图像必须精准呈现细胞的形状和尺寸；在细胞分类分析中，图像必须足够明亮清晰。我们的硅油浸入式物镜通过精确匹配活组织的折射率，可以优化完成活组织的3D成像操作，从而可以更精确地完成体渲染。与具有高灵敏度的制冷GaAsP检测器配合使用时，还可以轻松地获得明亮的、高信噪比的图像，从而可以获得具有高重复性的可靠精确的结果。
在肿瘤研究中，一定要确保细胞凋亡是实验过程的自然阶段，而不是因光毒性而引起。FV3000具有很高的灵敏度，并配备有激光功率监控系统，用户可以自由选择最低为0.01%的激光功率，因此有助于降低光毒性，获得生理学方面的更精确的图像数据。系统光谱的灵敏性和精确性可使研究人员使用多个生物标志物完成多色荧光标记实验，而无需担心细胞受到过多激光的照射。
通过cellSens软件的计波器分析功能完成血流成像及速度测量。
图像数据由Takuya Hiratsuka博士和Michiyuki Matsuda博士提供，生命科学研究生院，京都大学。
抗体药物治疗应用，NK细胞诱导的细胞杀伤实验。抗体治疗药物（蓝色）。GFP标记的NK细胞（绿色）。DAPI标记死亡细胞（红色）。 图像数据由Yuji Mishima博士提供，癌症化疗中心，日本癌症研究基金会。 |
肿瘤研究十分复杂，但是使用FV3000系统对细胞增殖进行的测量操作却非常简单。使用cellSens软件的宏功能，只需点击一下鼠标，即可对延时图像进行处理、计数，并生成报告。图像采集软件的布局可由用户根据具体的应用情况自行定制，而且用户在启动软件时可以选择所需的布局，这样就可使用户根据自己的需要定制符合逻辑的工作流程。可以很方便地重新加载特定的实验条件，从而可以确保获得相同的结果。
Fucci细胞周期研究，利用cellSens软件进行细胞计数和扩张分析，图像中显示有细胞数量增长的多个时间点，不同时间段的增长情况由不同的颜色区分。下图表明在不同时间内细胞增长的相对数量。
图像数据由Atsushi Miyawaki提供，细胞功能动力学实验室，日本理化学研究所脑科学研究中心。
时序管理器可以进行可变延时成像操作。
时序管理器可使用户在同一个实验中完成持续时间不同的延时成像，使用多个嵌套循环周期，并在常规振镜扫描和共振扫描之间进行切换。
干细胞成像需要使用更高级别的自动化和长时程延时成像功能。此类实验一般需要对细胞进行连续数天的观测，并要求极低的光毒性，严格的时间精度和焦距准确度，FV3000的设计完全满足了上述需求。要在多孔板的多点延时成像过程中保持聚焦状态，可以通过使用Z轴漂移补偿系统（IX3-ZDC2）加强系统的性能。在进行长时程实验时，可以使用激光功率监控系统，使照射到样本上的激光更加稳定。
高灵敏度检测器、硅油浸入式物镜、共振扫描振镜带来的低光毒性和高速扫描带来的高检测通量，都非常有利于干细胞成像研究。精准的激光刺激控制意味着光转化实验更加简单高效。细胞能够被准确刺激，并能进行数天的连续观测成像，实现细胞谱系追踪。无论是在微孔板、培养皿，还是在微流控装置中进行干细胞培养，FV3000的自动化及软件的智能化设计都能使整个实验流程大幅度简化。载物台导航仪具备多孔板导航功能，有助于显微镜系统方便地保存、修改及重新加载常用的孔板设置和图像采集条件。使用人员可对微流控通道中的单一路径进行快速成像操作。时序管理器使得长时程延时图像采集的设置变得简单直观。使用人员在保持时间精度的同时，还可以调整图像采集的速度和时间节点。使用FV3000软件包中的交互式渲染软件，可以快速浏览或获取3D和4D图像数据，并直接将这些数据用于论文写作或演讲报告。成像实验结束之后，单击鼠标，就能利用cellSens的宏分析功能，完成2D的细胞计数和分类。
MatTek EpiDermFT组织模型：免疫荧光标记了6个靶标蛋白。1. Abcam DRAQ5 ab108410, 2. Abcam GAPDH抗体（Alexa Fluor 405）ab206372, 3. Abcam微管蛋白抗体（Alexa Fluor 488）ab1955883, 4. Abcam纤维蛋白抗体（Alexa Fluor 568）ab202540, 5. Abcam波形蛋白抗体（Alexa Fluor 594）ab154207, 6. Abcam Ki67抗体（Alexa Fluor 647）ab 194724. 样本由MatTek提供。
FV3000和FV3000RS两款显微镜都提供一系列标配和选配的高级应用功能，其中包括奥林巴斯的超分辨率（FV-OSR）、光刺激、光谱拆分，和外置激光整合系统。通过精确的激光控制和奥林巴斯已获专利的超分辨率显示方式，FV3000显微镜可以高达120
nm的分辨率采集到图像，采集方法类似于结构照明法。FV3000系列产品还可配置满足众多应用需求的光谱拆分功能，及高效准确的光转化和光刺激功能，以开展高速目标轨迹扫描和采集映射等方面的研究。
时序管理器功能可以大大简化复杂的细胞周期成像流程。还为用户提供一些高端功能，如：随机目标选择或目标路径扫描功能，可在体外神经细胞信号的研究中，进行高信噪比的多点荧光测量；实时处理和触发功能可以为TTL信号驱动的外部设备提供精确协调的时间控制，如：灌流装置、刺激器或其它第三方搭载设备等。由于载物台导航仪及IX83显微镜机身的自动化性能，FV3000系列产品能轻松满足从宏观观察到微观成像的实验需求，并且软件界面、工作流程和实验设置参数都可以保存和重新载入。
| FV3000 | FV3000RS | ||
| 主激光耦合器 | 紫外光/可见光激光器 |
405 nm：50 mW，488 nm：20 mW，561 nm：20 mW，640 nm：40 mW
一个选配激光端口，可用于副激光耦合器或选配的激光设备 | |
|---|---|---|---|
| 选配激光器 | 副激光耦合器 |
最多3个激光设备，如下所述：
445 nm：75 mW，514 nm：40 mW，594 nm：20 mW，通过光纤与主激光耦合器连接 | |
| 单个激光器设备 | 445 nm：75 mW，514 nm：40 mW，或594 nm：20 mW，直接与主激光耦合器连接 | ||
| 激光控制 |
内置AOTF系统的主激光耦合器，可快速切换激光，并调制各个激光强度，连续可调激光强度（0.1 % ～ 100 %，步进值为0.1 %）
借助ND滤光片的10 %或最大100 %的激光功率变换器 | ||
| 扫描单元 | 扫描方式 | 2个镀银常规扫描振镜 |
2个镀银常规扫描振镜；
1个镀银共振扫描振镜和1个镀银常规扫描振镜 |
|
常规振镜扫描单元
（常规成像） |
扫描分辨率：64 × 64像素到4096 × 4096像素
扫描速度（单向）：512 × 512，时间为1.1秒 ～ 264秒；像素时间为2微秒 ～ 1000微秒 扫描速度（双向）：512 × 512，时间为63毫秒 ～ 250毫秒；256 × 256，时间为16毫秒 ～ 125毫秒 光学变焦：1X ～ 50X，增量为0.01X 扫描旋转：自由旋转（360度），步距为0.1度 扫描模式：PT、XT、XZ、XY、XZT、XYT、XYZ、XYλ、XYZT、XYλT、XYλZ、XYλZT 感兴趣区域扫描、矩形剪裁、椭圆形、多边形、自由形状、线、自由线及点、龙卷风模式 | ||
|
共振扫描单元
（高速成像） | - |
扫描分辨率：512 × 32像素 ～ 512 × 512像素
扫描速度：使用512 × 512像素时，每秒30帧，使用512 × 32像素时，每秒438帧 光学变焦：1X ～ 8X，增量为0.01X 扫描模式：XT、XZ、XY、XZT、XYT、XYZ、XYλ、XYZT、XYλT、XYZ、XYλZT 感兴趣区域扫描，矩形剪裁，线 | |
| 针孔 | 单一电动针孔，针孔直径ø50 ～ 800 µm（步进值为1 µm） | ||
| 视场直径（FN） | 18 | ||
| 分光镜转盘 | 8孔位（高性能DM和10/90镜） | ||
| 扫描单元可选部件 | 激光功率监控系统，选配激光端口 | ||
|
高灵敏度
光谱型检测器 | 检测器模块 | 制冷型GaAsP光电倍增管，2通道 | |
| 光谱分光方式 |
电动体相位全息透射衍射光栅，可以电动方式调节的狭缝，
可选波长带宽：1 ～ 100 nm，光谱分辨率：2 nm，步进精度：1 nm | ||
| 分光镜转盘 | 8孔位（高性能DM和分光镜） | ||
| 光谱型检测器 | 检测器模块 | 多碱光电倍增管，2通道 | |
| 光谱分光方式 |
电动体相位全息透射衍射光栅，可以电动方式调节的狭缝
可选波长带宽：1 ～ 100 nm，光谱分辨率：2 nm，步进精度：1 nm | ||
| 分光镜转盘 | 8孔位（高性能DM和分光镜） | ||
| 系统控制 | 控制设备 |
操作系统：Windows 7专业版64 bit（英文版），Windows 10专业版64 bit
内置专用I/F板和硬件序列器，用于成像过程中的精确时序控制 | |
| 显示 | 30或32英寸显示器（WQUXGA 2560 × 1600） | ||
| 荧光照明装置 | 外置荧光照明光源，通过光纤连接到扫描单元，共聚焦（LSM）光路和荧光观察光路之间的电动切换 | ||
| 透射光检测器 | 外置透射光光电倍增管检测器，LED光源，电动切换 | ||
| 倒置机身 | 正置机身（成像型） | 正置机身（电生理型） | ||||||
| 显微镜机身 |
电动倒置显微镜
IX83(IX83P2ZF) |
电动固定载物台正置显微镜
BX63L |
电动固定载物台正置显微镜
BX63L | |||||
| 物镜转换器 | 电动六孔转换器 | 电动六孔转换器 |
编码摇摆式物镜转换器
编码滑入式物镜转换器 | |||||
| 聚光镜 | 电动长工作距离聚光镜 | 电动万能聚光镜 | 手动长工作距离聚光镜 | |||||
| 调焦行程 |
内置电动物镜转换器聚焦
行程：Z轴精度为0.01 μm | |||||||
| 基本特性 |
专为暗室环境设计的图形化用户界面（GUI）。用户设置界面。
重新加载采集参数的功能。硬盘记录功能，在Z轴序列图像采集过程中调节激光的功率和电压（HV）。 Z轴序列图像的阿尔法混合、最大强度投影和ISO表面渲染技术。 | |
|---|---|---|
| 2D图像显示 | 每个图像的显示：单通道并列、合并、裁剪、实时图像拼接、实时平铺、系列（Z/T/λ）{LUT：单独色彩设置、伪彩色{备注：图形及文本输入 | |
| 3D视图和观察 |
交互式体渲染：体渲染显示、投影显示、动画显示。
3D动画（最大强度投影方式，阿尔法混合），3D和2D序列操作功能 | |
| 图像格式 |
OIR图像格式
8/16位灰度/索引颜色、24/32/48位色彩、JPEG/BMP/TIFF图像功能、奥林巴斯的多tif格式 | |
| 光谱拆分 | 荧光光谱拆分模式（最多16个通道） | |
| 图像分析 | 区域和线的测量、基于时间/Z轴的强度图、共定位分析 | |
| 统计处理 | 2D数据直方图显示 | |
| 选配软件 |
电动载物台控制
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许多生物过程的图像只能使用视频速度或更高的成像速度进行采集。FV3000RS的共振扫描器可以完成高动态过程的成像，如：钙离子波动、快速肌肉收缩、囊泡跟踪和血流等。将单位面积的照明时间（光子通量）降低到三重暗态弛豫时间以下，高速扫描就可以降低光漂白和光毒性，从而可以对活细胞和组织进行更深入的观察。FV3000RS的共振扫描器可在每秒30帧的成像速度下保持1X全视场和18视场直径，从而可为快速生物过程采集到具有更大背景的图像。
心肌细胞的FRET光谱查找表，心肌细胞的CFP光谱查找表，心肌细胞的微分干涉相差（DIC）图像，图像叠加，大鼠跳动心肌细胞中以黄色（变色物质）突出显示的自发性Ca2+震荡的IMD比例图像。 | |
在果蝇胚胎内观察到的内涵体的快速移动。
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小鼠血管内血小板结合形成血栓。通过装有2通道GaAsP光电倍增管的共振振镜以全幅30 fps的扫描速度获得的图像。Takuya Hiratsuka博士和Michiyuki Matsuda博士，京都大学生物研究研究生院。 | |
使用含硅罗丹明多西紫杉醇（微管蛋白，白色）和RFP中心体蛋白（绿色）标记的小鼠胚胎成纤维的3D延时图像；这个图像利用100X硅油浸入式物镜，以每秒钟30帧的共振扫描方式成像，并经过cellSens软件的反卷积处理而获得。Markus Delling博士，哈佛大学。 | |
使用含硅罗丹明多西紫杉醇（微管蛋白）标记的小鼠胚胎成纤维细胞。采用100X硅油浸入式物镜，以共振扫描平铺预览方式成像。XYZT 6 × 6区域。由哈佛大学的Markus Delling博士提供。 | |
在透射检测中对水蚤成像，每秒30帧。 |
采用16通道拆分技术的多通道TruSpectral全真光谱检测
TruSpectral全真光谱技术的高效设计和软件可使光谱检测器在多通道和波长模式下以阵列方式进行实时光谱拆分和后处理光谱拆分。在多通道和波长模式下，可以在图像采集过程中对复杂的荧光进行分割，从而有助于在活细胞实验过程中确保效果稳定的光谱拆分。由于4个不同通道阵列可以最多有4种不同的动态范围，通过对每个检测器的灵敏度单独进行调整，甚至可以区分明亮和微弱的光谱信号。
浦肯野细胞的脑彩虹AAV转染，使用Cai等人2013年所述的抗体放大信号。浦肯野细胞胞体、树突和轴突、以及颗粒细胞的某些非特异性染色均可辨识。 | |
在延时成像过程中，CFP（内涵体，蓝色）、mAmetrine（质膜，绿色）、mKO（细胞核，橙色）和mKeima（纤维状肌动蛋白，紫色）被拆分之前的实时图像。 图像数据由Kazuhiro Aoki博士和Michiyuki Matsuda博士提供，京都大学医学研究生院。 | |
实时盲拆分图像 图像数据由Kazuhiro Aoki博士和Michiyuki Matsuda博士提供，京都大学医学研究生院。 | |
经过光谱反卷积处理的9通道波长序列图像。 | |
原始光谱的采集。 |
传统共聚焦系统仅可为微观成像聚焦。但是，生物学家还需要在更大的组织和完整有机体的背景下以高倍率观察到局部的细节图像。FV3000可以完成1.25X的宏观成像操作，也可以在不超过150X的倍率条件下，保持超分辨率成像的能力。低倍率成像可以加快工作流程，获得更宽的样本全貌，并有助于消除通常因样本被倾斜安放或其它因素而出现的拼接伪影现象。
| 小鼠肾脏由Mike Davidson博士制备。谨以这些图像对其毕生致力于科学和显微技术的精神致以崇高敬意。 | |
半个冠状小鼠脑片。对应于GFP（Alexa Fluor 488，神经元）、SV2（Alexa Fluor 565，红色）和Homer（Alexa Fluor 647，蓝色）的二次抗体标记。
样本由Ed Boyden博士和Fei Chen博士提供，麻省理工学院。 | |
完整大鼠胚胎的2 × 2平铺图像，总视场20毫米。通过使用640 nm激光获得H&E荧光。 |
具有优质定位精度的多维延时成像
在共聚焦观察的过程中，FV3000可以通过使用多区域延时软件控制电动XY轴载物台和Z轴漂移补偿系统的方法，完成多维延时成像操作。
在很大程度上提高了多点延时成像效率
电动XY轴载物台有助于从分散在大区域中的多个点上，重复图像采集的操作。系统在单次实验中，可以有效地分析细胞内的物质随着时间的推移而发生的变化，并采集到大量的数据，从而提高了实验效率。可以使用微孔板进行多个平行实验，从而可以在很大程度上增加需要进行长期观察的实验量。
可以为微孔板单个凹槽里的多个区域反复采集图像。
经过PFA固定和SCALEVIEW-A2透明化处理的胰腺血管系统成像
通过穿心灌注方法并由德克萨斯红标记凝血素的血管。使用UPLSAPO30XS物镜成像。图像尺寸为425 µm × 436 µm（616 × 633像素）；Z轴：438 µm（219切片）。
图像数据由
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为大型样本完成高倍率、高分辨率的预览成像
使用20X物镜（UPLSAPO20X）采集的成年YFP-H小鼠大脑冠状面（30 μm厚）的拼接图像。
图像数据由Takako Kogure和Atsushi Miyawaki提供，细胞功能动力学实验室，日本理化学研究所脑科学研究中心。（7，第3页）
3D图像的自动采集和拼合成像
多区域延时软件可以自动完成从3D图像的采集（使用电动XY轴载物台）到拼接成像的过程。这个软件可以轻松记录大面积区域，并且可以通过缩略图显示方式为用户呈现在拼合成像过程中采集的整个图像。
多点和平铺成像
通过使用电动XY轴载物台，平铺功能可以将多个图像拼接在一起，创建一个宽大的样本图像。这个图像的制作方法是先在小鼠脑切片（YFP）的多个点上采集图像，然后再将这些图像拼接在一起。
可选择的渲染模式
交互式体渲染
使用带有3D显示功能的交互式体渲染软件，可以通过移动鼠标的方式将3D绘制图像的角度变换到想要观察的方向。这个软件还为用户提供了多种显示功能，其中包括景深扩展图像，以及显示体渲染中任何位置的横截面的能力。
4D动画创建功能
| 对于通过XYZT采集的图像，可以动画形式显示随时间而变化的3D结构。 |
深层成像过程中使用的亮度补偿功能
在采集3D图像时，图像会随着在组织中的深入而变得昏暗模糊。FV3000配备有一个功能，可以随着成像位置的深入而提高激光的强度或PMT的灵敏度，从而使图像在整个Z平面上保持均匀一致的亮度。
为用户提供的各种实时处理和后处理分析功能可以加强数据图像的效果：
精选介绍的cellSens图像处理和分析功能（请点击下面的链接，查看cellSens功能的完整列表）
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各种扫描模式均可用于共振扫描和常规振镜扫描。请点击“规格”选型卡，了解更多详细信息。
共振扫描
共振扫描可以在较大的视场中高速采集图像，提高动态测量性能，并降低光漂白和光毒性。FV3000RS的共振扫描振镜，可以每秒30帧的速度扫描1X全景，剪辑扫描的速度高达每秒438帧，线扫描速度高达7.87 kHz，因此完全具有采集动态图像的能力。
常规振镜扫描
常规振镜扫描具有很高的精度，优质的信噪比，而且还可提供更多的扫描路径和光刺激能力。FV3000系列产品的常规振镜扫描单元还提供一种隔行扫描模式，能够在每秒钟之内以2X的放大系数扫描16帧图像。
实时图形功能
在图像采集过程中，可以将感兴趣区域中荧光强度的变化以图形方式实时绘制出来。
带有回顾功能的实时平铺模式
这个功能可使用户核查在延时实验中采集到的图像。在实验间隙，用户可以对焦点或图像的亮度进行调整。
触发器功能
系统还有一个触发器功能，可使扫描操作与外接设备同步进行。可以通过触发信号启动或停止扫描操作，还可以使用一个外接触发器，完成每帧图像的采集。
选配激光功率监控功能
这个功能可以为激光输出提供反馈信息，从而可使样本所接收的激发光照始终处于一个固定的水平，而且还可以对荧光量进行精确地测量。
使用延迟仅为100毫秒的常规振镜扫描单元，可以进行快速连续的光刺激。可在活体样本上完成诸如FRAP和FLIP的应用，并实现复杂区域的光转化。
光转化（Kaede）
Kaede蛋白是一种典型的光转化蛋白，这种特定的荧光蛋白在某种特定波长光的照射下会改变颜色。当Kaede蛋白受到激光照射时，其荧光会由绿色变为红色。Kaede蛋白的这种特性可用于在一组细胞中标记单个目标细胞。
当受到紫外线激光照射的刺激时，Kaede蛋白的颜色会从绿色变成红色，就象秋天的枫树一样（在日语里“kaede”的意思是“枫树”）。我们可以观察到弥散在整个细胞中的淡红色的Kaede蛋白，因而这就成为标记整个细胞的一种方便而精确的方法。
通过Kaede蛋白突出显示的星形胶质细胞堆叠在由Kaede突出显示的神经元上。使用405 nm激光器照射两个细胞集落时，Kaede蛋白会由于光转化作用而从绿色变为红色。我们不仅可以观察到在胶质细胞形成细胞集落并扩展它们自身的过程中，它们与神经元的接触情况，还可以观察到这些细胞集落的细胞核。
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