Wie lange und wie oft kann eine Sonde verwendet werden?

Theoretisch könnte eine Sonde mehrere Male verwendet werden, doch wird dies aufgrund der hohen Wahrscheinlichkeit einer Kreuzkontamination nicht empfohlen. Im Prinzip könnten durch eine einzige Beladung der Sonde Millionen von Zellen injiziert werden, in der Praxis vermutlich Tausende von Zellen.

Sind Verstopfungen der Sonde häufig?

Obwohl das Verstopfen der Sonde ein bekanntes Problem bei Anwendungen wie der Mikroinjektion ist, wird es beim Fluid-FM-Ansatz nicht häufig beobachtet. Die Verstopfung der Sonde hängt von einer Reihe von Faktoren ab, in erster Linie vom Puffer und dem Molekül, das injiziert werden soll. Bei Anwendungen im Zusammenhang mit CRISPR-Cas9 scheint dies jedoch kein Problem darzustellen. Außerdem kann die Sonde vor dem Experiment beschichtet werden. Dadurch wird nicht nur verhindert, dass die Sonde verstopft, sondern auch, dass die Zellen nach mehreren Injektionen an der Sonde haften bleiben. Wir können sogar mehrere tausend Zellen mit derselben Sonde injizieren, ohne dass es zu Verstopfungen kommt.

Ist die Injektion von Oozyten möglich?

Die Injektion von Oozyten mittels Fluid-FM ist ein interessantes Thema, das bisher jedoch noch nicht untersucht wurde. Vermutlich könnten Sonden und Protokolle entwickelt werden, die eine solche Anwendung ermöglichen würden.

Gibt es irgendeine Beschränkung hinsichtlich der injizierbaren Dosierung oder Menge?

Es ist möglich, die Konzentration der in die Nanospritze geladenen Flüssigkeit und auch die in die Zelle injizierte Konzentration anzupassen. Zusätzlich kann der Druck verändert werden, um das injizierte Volumen zu steuern. Große Mengen können jedoch zu einer Zelllyse führen, daher ist das Injektionsvolumen auf etwa einen Pikoliter begrenzt. Diese Begrenzung gilt für alle Anwendungen.

FluidFM: Ein neuer Ansatz für das CRISPR-Genediting durch direkte Einbringung in den Zellkern

In einem von Olympus Life Science und Cytosurge gemeinsam produzierten Webinar wird erläutert, wie eine der größten Herausforderungen beim Genediting bewältigt werden kann: die Einbringung von Reagenzien in den Zellkern.

Bei herkömmlichen Einbringungsmethoden, wie der Transfektion oder Elektroporation, ist der Erfolg der CRISPR-Cas-Genschere begrenzt und die Zellen werden stark beansprucht. In der Regel kann nur eine Veränderung des Erbguts auf einmal und in begrenztem Umfang erfolgen. Die Reagenzien müssen die Zellmembran, das Zytoplasma und die Zellkernhülle passieren, bevor sie den Zellkern erreichen. Herkömmliche Einbringungsmethoden sind für diesen relativ langen Weg nicht optimal geeignet. Das erklärt, warum die Transfektionseffizienz häufig niedrig ist und mit einer geringen Viabilität verbunden ist.

Mit der Cytosurge FluidFM BOT BIO Serie lassen sich die Einschränkungen herkömmlicher Transfektionsmethoden umgehen, indem die gewünschte Einbringung durch drucksensitive Nanoinjektion direkt in den Zellkern erfolgt. Diese Methode ist einfach, unabhängig davon, welches Material eingebracht wird, und schonend. Sie ermöglicht es, genau definierte Mischungen wie Cas9, Reparaturtemplates und mehrere gRNAs in den Zellkern einzuführen.

Eine verbesserte Effizienz und Viabilität sind besonders wichtig, wenn es um seltene oder schwer zu transfizierende Zellen geht, zum Beispiel induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs), Neuronen oder Kardiomyozyten, oder wenn große Reparaturtemplates eingebracht werden müssen.

Erfahren Sie mehr zu diesen Neuheiten und melden Sie sich noch heute an. Sie erhalten Informationen zu folgenden Themen:

Wie mit der FluidFM BOT BIO Serie bekannte Einschränkungen beim Genediting umgangen werden können
Die Funktionsweise des Nano-Injektionsprozesses anhand einer Live-Demonstration

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